Молекулярно-биологические методы диагностики ВПЧ-инфекции
Раку шейки матки на протяжении нескольких лет предшествуют предраковые поражения, которые именуются CIN-интраэпителиальными цервикальными неоплазиями трех степеней. СIN I не является предраком и имеет высокую степень регрессии, однако при наличии вируса ВПЧ CIN с высокой вероятностью переходит в CIN II и CIN III, истинные предраковые поражения. Существует широкий спектр методов диагностики рака шейки матки и предраковых поражений:
- клинические;
- цитологические (Pap-test);
- расширенная кольпоскопия;
- определение ДНК ВПЧ с помощью ПЦР в режиме реального времени;
- определение вирусной нагрузки ВПЧ с помощью Digene-тест;
- жидкостная цитология;
- морфологическое исследование;
- онкомаркёры: определение онкобелков p16, ki67, mcm2, mcm7, Hsp27 и др;
- сканирование шейки матки в режиме реального времени (TruScreen).
Тестирование на ДНК ВПЧ относится к молекулярно-биологическим методам, используется в дополнении к цервикальному скринингу у женщин, начиная с 30-летнего возраста, а также в качестве сортировочного теста при неясных результатах цитологических исследований. Молекулярно-биологические методы предоставляют информацию о развитии ВПЧ-инфекции, но не позволяют судить о наличии заболевания, поскольку факт инфицирования ВПЧ не всегда сопряжен с заболеванием. Два основных метода диагностики ДНК ВПЧ — полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени и метод гибридного захвата (Digine-тест). Оба метода практически не отличаются по чувствительности и специфичности, однако, сертифицирован и одобрен FDA только Digene-тест.
Digene-тест
Технология Digene-теста основана на гибридном захвате и заключается в уникальном способе связывания вирусной ДНК с РНК-зондом, захвате полученного гибрида моноклональными антителами и хемилюминисцентной детекции образуемых комплексов.
По сути это качественный тест, который применяется для профилактического скрининга для ранней диагностики патологии шейки матки. Тест идентифицует 13 генотипов высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и 5 генотипов низкого риска (6, 11, 42, 43, 44).
Тест одобрен Федеральной службой РФ по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (ФСНСЗСР). Digene-тест выявляет клинически значимый уровень инфицирования вирусом папилломы человека, который приводит к развитию неоплазии шейки матки. Положительный результат теста выдается в единицах Digine. Отрицательный тест практически исключает CIN II и CIN III.
Обнаружение ДНК ВПЧ в качественном формате
ДНК ВПЧ длительно сохраняется в образцах тканей, поэтому ее легко можно идентифицировать. Для определения достаточно минимального количества исследуемого образца. «Качественное» определение ДНК ВПЧ имеет спорную клиническую значимость, поскольку указывает только на факт наличия вируса, не позволяя сделать прогноз относительно течения инфекции. В большинстве случаев инфекция элиминируется самостоятельно.
Количественное определение вируса ВПЧ
Количественный анализ ДНК ВПЧ наиболее чувствителен на ранних этапах папилломавирусной инфекции, когда отсутствуют другие признаки инфицирования. Например, цитологические, клинические. Метод количественного определения используется в качестве скрининга, особенно в рамках национальных программ контроля рака шейки матки, а также для оценки эффективности терапии.
Количественные ПЦР-методы направлены на максимальную чувствительность выявления вирусной ДНК, однако, не всегда существуют прямые клинические корреляции.
Одним из критериев клинически значимой инфекции, которая с высокой степенью вероятности способна развиться в неоплазию, рассматривается вирусная нагрузка. Вирусная нагрузка 3 lg на 105 клеток является клинически малозначимой, поскольку сопровождается минимальным риском дисплазии и почти в 100% случаев заканчивается спонтанной регрессией. Вирусная нагрузка больше 5 lg на 105 клеток считается повышенной и сопряжена с высоким риском развития дисплазии. Снижение вирусной нагрузки на 1 lg за 6 месяцев говорит о транзиторной инфекции.
Прогностическая ценность вирусной нагрузки на сегодняшний день однозначно не определена.
Генотипирование вируса
Генотипирование вируса методом ПЦР позволяет определить тип вируса ВПЧ и его онкогенность. Этот метод подходит для выявления персистенции ВПЧ и позволяет отличить случаи реинфекции. О реинфицировании говорит изменение спектра генотипов, о персистентной инфекции — сохранение генотипа вируса через год после первого тестирования.
При инфицировании несколькими генотипами ВПЧ одновременно, прогноз течения заболевания менее благоприятный, а риск персистенции и риск развития РШМ по сравнению с инфицированием одним типом более высокий.
Выявление ВПЧ высокого риска свидетельствует о наличие папилломавирусной инфекции. ВПЧ высококанцерогенного риска имеют различный онкогенный потенциал. На долю самых опасных, 16 и 18, приходится около 70% всех случаев цервикального рака. Генотипирование на ВПЧ 16 и 18 позволяет выделить группу женщин, которые имеют повышенный риск развития цервикального рака.
Рекомендации ВОЗ по профилактике рака шейки матки
Методы:
- основной — цитологический;
- дополнительный — ДНК тесты.
- Наиболее широкий охват женщин.
- Одноразовый скрининг женщин, 35–40 лет.
- Идеальный алгоритм скрининга: 25–65 лет сначала 2 года подряд, при отрицательных результатах каждые 3 года.
- Использование ВПЧ-тестирования позволит увеличить промежутки между скринингами до 5 лет.
- Использование ВПЧ-тестирования совместно с цитологическим методом: одновременно В качестве первичного метода ВПЧ-тестирование. В качестве вторичного метода — цитология.
Преимущества использования ВПЧ-тестирования
- ВПЧ-тестировние лучше использовать вместе с цитологическими методами диагностики, так как ВПЧ-тестирование обладает значительно более высокой отрицательной предсказательной ценностью, чем цитология.
- Анализ ДНК ВПЧ дает более интерпретируемый результат.
- В меньшей степени зависит от человеческого фактора.
- Проба для ВПЧ-теста пригодна для анализа дополнительных молекулярных маркёров.
Генитальные бородавки
Если не лечить генитальные бородавки, они могут исчезнуть самостоятельно, остаться прежними или увеличиться в размере или в количестве. Если бородавки находятся в лобковой области, избегайте бритья или депиляции, так как это может распространить бородавки. Генитальные бородавки не приводят к раку и могут развиться через месяцы или годы после заражения ВПЧ, они могут передаваться другому человеку, даже если нет видимых признаков бородавок.
Скрининг рака шейки матки — ключевая информация
ВПЧ является распространенной инфекцией и часто подавляется естественным иммунитетом. Большинство видов рака шейки матки можно предотвратить с помощью вакцинации против ВПЧ и регулярного скрининга. Вакцинация против ВПЧ, в идеале до начала половой жизни, является первой линией обороны и наиболее эффективным способом профилактики инфекции. Презервативы, используемые правильно, могут снизить шансы на приобретение и передачу ВПЧ и развитие заболеваний, связанных с данным вирусом.
Причины возникновения заболевания
Вирус — это инфекция, а значит для его появления в организме должно произойти заражение.
ВПЧ проникает в кожу и слизистые оболочки здорового человека при их контакте с папилломами больного или с визуально неизмененными кожными покровами и слизистыми инфицированного человека при условии, что в месте контакта находится большое количество вируса и имеются повреждения целостности эпителия (потертости, царапины, ранки, эрозии, язвочки). Особенно характерно заражение ВПЧ при наличии высыпаний простого герпеса, через которые в кожу и кровь проникает вирус папилломы человека.
Что делать, если выявлены опасные типы ВПЧ?
Риск обнаружения опасных типов ВПЧ у отдельно взятого человека невысокий.
У большинства людей никакие разновидности этого вируса не выявляются вообще.
Если же пациент инфицирован, то с высокой вероятностью это неопасный тип ВПЧ.
Низкоонкогенные разновидности встречаются гораздо чаще.
Если же вам не повезло, и у вас обнаружили высокоонкогенный ВПЧ, нужно смотреть на его количество.
В случае, когда оно небольшое, лечение не требуется.
Скорее всего, ваш организм уже начал избавляться от вируса, и вскоре он перестанет определяться.
Хуже, если концентрация его высокая.
В таком случае необходимо следующее:
- дополнительные анализы;
- лечение;
- динамическое наблюдение.
У пациентки берут мазок на онкоцитологию.
Чаще всего это исследование проводят не после генотипирования ВПЧ, а одновременно с этим тестом.
По результатам этих двух анализов может быть принято решение о необходимости кольпоскопии.
Она нужна для выявления участков измененного эпителия (предраковых процессов).
В свою очередь результаты кольпоскопии (осмотра цервикса) могут потребовать проведения биопсии.
Это процедура, при которой берут фрагмент ткани и отправляют на гистологическое исследование.
По его результатам может быть диагностирована как злокачественная опухоль, так и предраковый процесс 1-3 стадии.
1 стадия обратима, тогда как на 2-3 требуется «прижигание», чтобы предотвратить рак.
Но развиваются предраковые процессы очень медленно.
Если вовремя провести противовирусное лечение, то вирус исчезает из организма, и эпителий шейки матки восстанавливается.
Пациентов обязательно наблюдают.
Они сдают анализы раз в полгода, чтобы оценить, увеличивается или уменьшается концентрация вируса.
Для его элиминации используют противовирусные и иммуномодулирующие препараты.
Как передается заболевание?
Это нужно знать для того, чтобы правильно назначить диагностику. Путей передачи много. Вирус может находиться на любом участке кожи или слизистой оболочки, то есть там, где есть эпителиальные клетки.
Наиболее частые способы передачи вируса папилломы человека:
- Половой вагинальный контакт.
- Анальный секс.
- Оральный секс (кунилингус в том числе) — возможно инфицирование глотки и гортани с развитием онкологии этих органов.
- Поцелуй при наличии микротравм слизистой оболочки.
- От матери к плоду при прохождении через родовые пути.
- При тесном контакте поврежденных кожных покровов с папилломами другого человека. Повреждения могут быть не заметны и часто образуются при половом контакте в области лобка, мошонки, половых губ, что дает возможность заражения ВПЧ при использовании презерватива.
- Передача вируса с поверхности бородавок на поврежденную кожу.
Когда осуществялется забор материала?
Методика забора материала для диагностики и вообще сам материал зависят от проявлений папилломавирусной инфекции.
Если имеются элементы на коже и видимой слизистой оболочке, то при помощи универсального урогенитального зонда врач дерматовенеролог или гинеколог проводит соскоб клеток с поверхности папилломы. Полученные клетки помещаются в пробирку для доставки в лабораторию и проведения анализа ПЦР на ВПЧ. Манипуляция абсолютно безболезненная и занимает около 30 секунд.
При диагностировании папилломавирусной инфекции в уретре, во влагалище, цервикальном канале, особенно при наличии эрозии шейки матки, соскоб проводится из этих органов, желательно и самой эрозии.
Если папилломы имеются на слизистой ротовой полости или прямой кишки, то зондом берут материал с этих участков.
При необходимости диагностики заболеваний предстательной железы, мочевого пузыря может на ВПЧ браться моча и секрет простаты.
Сдать анализ на ВПЧ в Москве у нас
Для планирования профилактических методов, конечно же, важна диагностика ВПЧ. Необходимо знать, есть этот вирус у Вас или нет, чтобы понимать риски для половых партнеров и перспективы развития этого заболевания. Поэтому, даже, если нет никаких проявлений, анализы на папилломавирусы необходимы при полноценном обследовании у уролога или гинеколога.
Где можно сдать анализы на ВПЧ: ежедневно с 10:00 до 21:00 в наших клиниках без выходных и в праздничные дни. При необходимости можно получить исчерпывающую консультацию по диагностике и лечению папилломавирусной инфекции опытных врачей урологов, гинекологов и венерологов.
