Human Papillomavirus, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Зачем нужно ВПЧ-генотипирование?

ВПЧ является гетерогенным вирусом.

Это означает, что существует множество его форм.

Фактически, это целое семейство вирусов, различных по уровню патогенности.

При заражении разными типами ВПЧ в разной степени увеличивается риск рака, возникают разные симптомы.

Около 40 типов ВПЧ передаются половым путем.

Четырнадцать из них являются вирусами высокого онкогенного риска.

Таким образом, генотипирование используется для того, чтобы узнать: какой тип вируса персистирует у пациента.

Это важно для оценки онкогенного риска.

Ведут пациентов с разными типами ВПЧ совершенно по-разному.

Если с низкоонкогенными вирусами человеку можно удалить бородавки и отправить домой, то обнаружение высокоонкогенных типов требует динамического наблюдения.

Возрастает роль медикаментозной терапии.

Человеку важно избавиться от носительства вируса как можно скорее, чтобы предотвратить предраковые процессы и онкологические заболевания.

ПЦР диагностика папилломавирусов КВАНТ 21

Выявление возбудителя папиллома-вирусной инфекции (Human Papillomavirus), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени исследуется ДНК вирусов в образце биоматериала.

При этом определяется наличие и количество ВПЧ:

• низкого онкогенного риска (6, 11, 44 типы);
• высокого онкогенного риска (16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82 типы).

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Формат выдачи результата:

Тип ВПЧ; количество ВПЧ: Lg копий в расчете на 100 000 эпителиальных клеток, Lg копий/образец.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок урогенитальный, мазок урогенитальный (с секретом предстательной железы), ректальный мазок, мазок из ротоглотки.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Женщинам рекомендуется сдавать урогенитальный мазок или мочу до менструации или через 2 дня после ее окончания.
• Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка или мочи.

Общая информация об исследовании

Вирусы папилломы человека (ВПЧ) широко распространены, поражают эпителий кожи и слизистых оболочек и обладают онкогенным потенциалом. ВПЧ передается при тесном контакте с инфицированным эпителием, поэтому основные пути заражения — половой и контактно-бытовой. Возможна передача ВПЧ от инфицированной матери к плоду. Человек может быть инфицирован несколькими типами ВПЧ.

К факторам, провоцирующим развитие ВПЧ-инфекции, относятся: ранее начало половой жизни, большое количество половых партнеров, сниженный иммунитет, применение оральных контрацептивов, авитаминозы, инфекции, передаваемые половым путем, курение и проживание в крупных городах.

Инкубационный период может длиться от 2 месяцев до 2-10 лет. Характерно скрытое течение заболевания, при котором отсутствуют клинические проявления, а при кольпоскопическом, цитологическом и гистологическом обследовании выявляется норма. В 30 % случаев в течение 6-12 месяцев может произойти избавление от вируса. Диагностика скрытой ВПЧ-инфекции осуществляется только методом ПЦР.

При острой инфекции возникают доброкачественные образования, такие как папилломы, бородавки, кондиломы. У детей папиллома-вирусы могут приводить к папилломатозу гортани. Поражение клеток трофобласта папиллома-вирусами чревато спонтанным абортом.

Объединение ДНК папиллома-вируса с геном клетки приводит к дисплазии/неоплазии (чаще всего в переходной зоне шейки матки).

Для чего используется исследование?

• Для выявления папиллома-вирусной инфекции высокого онкогенного риска.
• Для подтверждения/исключения персистирования определенного типа ВПЧ.
• Чтобы оценить степень канцерогенного риска у женщин с дисплазией эпителия шейки матки.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата

• Инфицирование папиллома-вирусом.

Причины отрицательного результата

• Отсутствие папиллома-вирусной инфекции.
• Низкое содержание ВПЧ в крови.

Выявление ДНК ВПЧ в исследуемом материале свидетельствует о наличии папиллома-вирусной инфекции. Если ДНК ВПЧ в исследуемом биоматериале не выявляется, то наличие папиллома-вирусной инфекции маловероятно.

• от 3 Lg до 5 Lg (ВПЧ/10 5 клеток) — клинически значимая вирусная нагрузка, нельзя исключить дисплазию, существует риск развития дисплазии
• > 5 Lg (ВПЧ/105 клеток) — клинически высокозначимая вирусная нагрузка, высокая вероятность наличия дисплазии

У всех ли ВПЧ вызывают рак?

Конечно же, далеко не у каждого человека вирусы вызывают рак.

Даже те, которые имеют высокий онкогенный риск.

В 90% случаев человек заражается, и самостоятельно излечивается в течение 1-2 лет.

Часто у него вообще нет никаких симптомов.

В иных случаях появляются кондиломы или изменения эпителия.

Но патологические очаги исчезают после элиминации вируса.

Тем не менее, в 10% случаев формируется хроническая персистирующая инфекция.

Именно она представляет наибольшую угрозу.

Чаще всего ВПЧ вызывает цервикальный рак у женщин.

Другие виды злокачественных опухолей, в том числе среди мужчин, являются большой редкостью.

К ним относятся новообразования:

• кожи;
• члена;
• ануса;
• прямой кишки;
• гортани;
• пищевода;
• мочевого пузыря.

Наблюдение требуется в первую очередь за женщинами.

У них вирус вызывает цервикальный рак, а это самая распространенная причина смерти от онкологических причин среди пациенток репродуктивного возраста.

Чаще в этот период встречается только рак груди.

Но от него умирают реже.

Коварство заболевания состоит в том, что выявляется оно поздно, а эффективность лечения низкая уже со 2 стадии.

Тем не менее, цервикальный рак распространен только в странах с низким уровнем медицины.

Это полностью контролируемое заболевание.

Рак не развивается на ровном месте.

Существует множество способов предотвратить его.

Для этого можно вовремя выявить ВПЧ, провести генотипирование, установить наблюдение в случае обнаружения вируса высокого онкогенного риска.

Уже на этом этапе медикаментозное лечение часто позволяет избавиться от инфекции и предотвратить предраковые процессы.

Если же выявлены предраковые заболевания, то они могут быть излечены.

И на всё это у женщины есть даже не годы – десятки лет.

Но если она никогда не ходит к гинекологу и не сдает анализы, то цервикальный рак появляется и развивается.

Хотя происходит это медленно, выявить болезнь вовремя шансов нет.

Потому что симптомы отсутствуют вплоть до того момента, когда патология становится неизлечимой.

Инфекция, вызываемая вирусом папилломы человека

ВПЧ – группа распространенных и генетически разнообразных вирусов, инфицирующих и поражающих эпителий кожных покровов (кожные типы ВПЧ) и слизистых оболочек ротовой полости и аногенитальной области (генитальные типы ВПЧ). Генитальные типы ВПЧ передаются преимущественно половым путем и через родовые пути от матери ребенку. Основными клиническими формами папилломавирусной инфекции гениталий являются остроконечные кондиломы, а также злокачественные формы изменения эпителиальных клеток, приводящие к раку шейки матки.

Исход инфекции зависит от типа вируса. Типы ВПЧ низкого канцерогенного риска (НКР, низкоонкогенные) связаны с остроконечными кондиломами и дисплазиями легкой степени. Типы ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР, высокоонкогенные) – 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 – наряду с остроконечными кондиломами и дисплазиями легкой степени, также индуцируют злокачественную трансформацию эпителия, приводящую к инвазивному раку.

Дифференциальная диагностика.

Поражения шейки матки, влагалища, вульвы, пениса, заднего прохода непапилломавирусной этиологии; в случае остроконечных кондилом – с проявлениями, связанными с вирусом простого герпеса, а также с истинными папилломами.

Лабораторная диагностика папилломавирусной инфекции включает

выявление и количественное определение ДНК ВПЧ ВКР, генотипирование ВПЧ ВКР, выявление ДНК ВПЧ НКР.

Материал для исследования

• Соскобы эпителия цервикального канала, влагалища, вульвы, заднего прохода – для выявления, количественного определения и генотипирования ВПЧ;
• мазки из ротовой полости и гортани – выявления ВПЧ НКР у детей.

Выявление и определение концентрации вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска

Показания к обследованию

• Определение группы риска по развитию рака шейки матки и рака заднего прохода;
• скрининговые программы с цитологическим исследованием одновременно или на первом этапе скрининга (до цитологического исследования) для женщин старше 30 лет;
• разрешение неопределенных и сомнительных результатов цитологических исследований (наличие ASCUS – атипичные плоские клетки неясного значения);
• контроль эффективности терапии тяжелой дисплазии (CIN2+) через 6 месяцев после удаления пораженного эпителия;
• проведение дифференциальной диагностики с заболеваниями непапилломарусной этиологии.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики.

Для выявления ДНК ВПЧ ВКР используют МАНК (ПЦР, NASBA, TMA и др.) и методы амплификации сигнала (гибридный захват). Культивировать вирус не удается.

Гибридный захват является первым и наиболее охарактеризованным методом выявления ДНК ВПЧ. Применение метода позволяет определять концентрацию вируса в условных единицах оптической плотности, линейный диапазон небольшой (3–4 порядка). Образцы, в которых присутствует вирус в концентрации ниже порога клинической значимости, учитываются как отрицательные. Граница клинической значимости определяется путем тестирования эталонного образца (концентрация ДНК ВПЧ 1 пг/мл). Все сигналы, значения которых ниже эталонного, считаются отрицательными. Более современными, быстрыми и удобными для использования являются методы на основе АНК. МАНК, работающие в неколичественном формате, выявляют либо ДНК вируса (ПЦР, HDA и др.), либо мРНК транскрипты онкогенов E6 и E7 ВПЧ (NASBA, TMA). Для выявления только клинически значимых концентраций (по разным методикам учета – более 1 пг/мл или 1000 копий ДНК вируса на 100000 клеток человека) используют методики с чувствительностью, при которой образцы с низкой концентрацией учитываются как отрицательные. Наиболее целесообразно использовать ПЦР в реальном времени, которая позволяет точно определить концентрацию ДНК вируса. На основе полученных данных проводится не только оценка концентрации вируса, но, что важно, проводится градация результата по клинической значимости полученной концентрации на:

• положительный – выше порога клинической значимости;
• положительный – малозначимый (ниже порога значимости);
• отрицательный.

Различные наборы реагентов могут отличаться спектром выявляемых генотипов. К группе ВПЧ ВКР относятся 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 генотипы. Наиболее канцерогенными считаются 16 и 18 типы, наименее – 51, 56, 68. Для РФ и стран СНГ клинический смысл исследования сохраняется только при определении как минимум 10 генотипов из перечисленных выше. Выявление в смеси генотипов низкого или неустановленного риска существенно снижает специфичность выделения группы риска онкологической патологии и не может быть оправдано.

Показания к применению различных лабораторных исследований.

Для проведения скринингового обследования на наличие предрака и рака шейки матки предпочтительным является использование мазков/соскобов эпителия цервикального канала и зоны трансформации, выполненных цервикальными цитологическими щеточками. Допускается использование для этих целей мазков из влагалища. Для скрининга рака шейки матки все тесты, вне зависимости от выбранной технологии, должны иметь сбалансированные аналитические и диагностические характеристики, удовлетворяющие следующим условиям – не менее 98% чувствительность по отношению к CIN2+ и не менее 90% специфичность относительно широко валидированного в скрининге теста (например, Hybrid Capture II). Для достижения оптимума аналитической чувствительности избирают подход отсечения образцов с концентрацией ДНК ВПЧ ниже порога клинической значимости. Для этого либо проводят искусственное снижение аналитической чувствительности, либо выбирают в качестве референтного контрольный образец с требуемой пороговой концентрацией. Предпочтительным является измерение концентрации ДНК ВПЧ методом ПЦР в реальном времени.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований.

Обнаружение ДНК ВПЧ в любой концентрации свидетельствует о наличии возбудителя, однако при интерпретации результатов тестирования следует учитывать, что более 80% инфицированных спонтанно излечиваются в течение 12–24 мес. Опасность представляет персистентная форма инфекции (сохраняющаяся более 12–24 мес.). Однократный положительный результат надежно указывает на принадлежность к группе риска развития рака шейки матки в случае, если исследование проводится в группе женщин старше 30 лет или вступивших в половую жизнь более 6–7 лет назад. Особая настороженность должна быть проявлена в отношении пациенток, у которых подтверждается персистенция вируса при повторном тестировании через 1 год. При скрининге с использованием количественных тестов принимают во внимание только клинически значимый результат. Для дифференциальной диагностики и наблюдения пациентов после проведения лечения дополнительная ценность одиночного количественного определения не показана. Перспективным в прогнозе риска рецидива CIN2+ является оценка динамики вирусной нагрузки после лечения (снижение или увеличение концентрации вируса).

Генотипирование вирусов папилломы человека.

Цель генотипирования ВПЧ – отличие персистирующей инфекции от случая повторного инфицирования (сохранение генотипа в повторных тестах); уточнение тактики ведения больных в зависимости от онкогенности выявленных типов вируса.

Показания к обследованию.

Пациенты с выявленной папилломавирусной инфекцией ВКР

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики.

Для генотипирования ВПЧ используют МАНК. Распространение получили методики с детекцией продуктов амплификации методом электрофореза (генотипирование по величине амплифицируемого фрагмента), гибридизации на плашках и стрип-полосках, ПЦР в реальном времени.

Классические методики, использующие принцип гибридизации со специфическими зондами позволяют определять наиболее широкий спектр генотипов (20–40). Однако использование для амплификации универсальных праймеров приводит к существенным различиям в аналитической чувствительности выявления различных генотипов ВПЧ, приводя к заметным искажениям результатов. Кроме того, широкий спектр определяемых генотипов необходим только для научных исследований. В клинической практике достаточным может считаться генотипирование ВПЧ ВКР (10–13 типов). Методики, основанные на применении типоспецифических олигонуклеотидов, позволяют проводить типирование спектра клинически значимых генотипов и в заметной степени лишены проблемы различий аналитической чувствительности по отношению к разным генотипам ВПЧ. Предпочтение должно отдаваться мультиплекс-методикам с использованием ПЦР в реальном времени как наиболее быстрым, контаминационно безопасным, предполагающим возможность автоматизации. Может проводиться сокращенное генотипирование с выявлением только наиболее онкогенных типов ВПЧ 16 и 18.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований.

Для установления персистенции вируса применяют подход повторного генотипирования через 12 месяцев. Персистенция подтверждается при сохранении генотипа/ генотипов при повторном исследовании, полная смена спектра генотипов указывает на излечение и повторное инфицирование альтернативными ВПЧ. Выявление наиболее онкогенных типов ВПЧ (16 и 18) может указывать на потребность в более агрессивной тактике ведения больных (более частые повторные визиты, более тщательное обследование для выявления предраковых изменений и др.).

Выявление вирусов папилломы человека низкого канцерогенного риска

Показания к обследованию

• Определение группы риска развития папилломатоза гортани у ребенка (беременные и новорожденные);
• дифференциальная диагностика с заболеваниями непапилломавирусной этиологии.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики.

Для выявления ДНК ВПЧ НКР используют МАНК (ПЦР, NASBA, TMA и др.) и методы амплификации сигнала (гибридный захват). Предпочтение должно отдаваться быстрым и контаминационно-безопасным методикам, таким как ПЦР в реальном времени.

Клинически оправданным является определение двух генотипов 6 и 11 (более 90% случаев папилломатоза гортани у детей). Некоторую дополнительную ценность имеет выявление 42, 43 и 44 генотипов. Количественное определение не оправдано.

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований.

Выявление 6 и/или 11 генотипов указывает на возможный риск развития папилломатоза гортани у ребенка (риск повышается, если вирус обнаружен в гортани). При планировании беременности может быть рекомендована выжидательная тактика. При сопутствующем наличии остроконечных кондилом – их лечение методом химической и/или физической деструкции. При наличии беременности ее прерывание или родоразрешение методом кесарева сечения не оправданы, так как риск развития папилломатоза гортани ниже риска возможных осложнений указанных операций.

ВПЧ генотипирование: что дает этот анализ

Это процесс определения типа вируса.

Он основан на определение участка ДНК, то есть, генотипа возбудителя.

Цели исследования:

• определение онкогенных типов вируса;
• установление степени онкогенного риска для конкретного пациента (определяется вирус в сочетании с другими методами исследования);
• определение терапевтической тактики.

В итоге проведения теста врач получает такую информацию:

• является ли персистирующий в организме человека вирус высокоонкогенным;
• какой это тип вируса (даже внутри группы онкогенных ВПЧ есть вирусы, которые в большей или меньшей степени повышают вероятность рака);
• в какой концентрации он содержится (если вирусов мало, вполне вероятно, что организм вскоре избавиться от них самостоятельно).

Анализ ВПЧ 16 и 18

Показания к исследованию

1. Определение группы риска по развитию рака шейки матки и рака заднего прохода
2. Скрининг шейки матки для женщин старше 30 лет
3. Обследование при сомнительных результатах онкоцитологии
4. Контроль эффективности терапии тяжелой дисплазии
5. Профилактическая диагностика ВПЧ при смене партнера, контакте с носителями, практика анального секса и пр.

Сдача анализов на ВПЧ 16 типа в клинике возможна мужчинам, женщинам, девушкам-девственницам и девочкам-подросткам. Далее расскажем подробнее про основные разновидности данного исследования.

Места взятия анализа:

• вульва,
• влагалище,
• шейка матки,
• анус,
• прямая кишка,
• уретра (м+ж),
• рото-носоглотка (м+ж),
• крайняя плоть (м).

Качественный анализ ВПЧ 16/18

Качественный тип исследования позволяет определить лишь наличие определенного штамма вируса в организме. Расшифровка ВПЧ 16 и ВПЧ 18 у женщин будет содержать одно из слов: «Обнаружено» или «Не обнаружено». Например, ВПЧ 16 18 положительный (+), если фрагменты ДНК вируса были выявлены в биоматериале, или ВПЧ 16 18 отрицательный (-), если таковые не были обнаружены. Тем женщинам и мужчинам, у кого в анализе на вирус папилломы человека обнаружатся онкогенные типы 16 и 18, необходимо сделать дополнительные уточняющие тесты, чтобы узнать, в какой концентрации (количестве) они присутствуют.

Пример расшифровки ВПЧ 16/18 (качественный вид анализа)

Количественный ВПЧ 16/18

Исследование позволяет определить концентрацию в организме мужчины или женщины (вирусную нагрузку) ВПЧ 16/18 типа. Само по себе обнаружение минимального числа ДНК вируса папилломы человека говорит о хорошем иммунитете. Но нельзя исключать и тот факт, что заражение могло произойти совсем недавно (в этом случае результат количественного анализа на ДНК ВПЧ 16/18 будет сомнительным). Поэтому через время стоит сдать повторный анализ.

Пример расшифровки ВПЧ 16/18 (количественный анализа)

Расширенный анализ ВПЧ 16, 18 (ДНК и количество)

Тест с определением количества и отдельным выявлением 16 и 18 типов вируса позволяет выявить суммарное количество ВПЧ высокого онкориска (тип 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) + количество ВПЧ 16 и 18 отдельно.

В соответствие с международным требованием к ВПЧ-тестам, предназначенным для цервикального скрининга, они должны выявлять только типы высокого онкогенного риска. По данным международного противоракового агентства (IARC) к ним относятся не более 14 типов: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Среди этих типов важно выделять наиболее канцерогенные 16 и 18 типы, поскольку они чаще и быстрее приводят к развитию предраковой патологии шейки матки (цервикальной интраэпителиальной неоплазии – CIN). На ВПЧ 16 и 18 типов в совокупности приходится более чем 70% случаев рака шейки матки. Современные ВПЧ-тесты, основанные на ПЦР с детекцией в режиме реального времени (Real-time PCR) позволяют выявлять 16 и 18 типы вируса достаточно точно.

Расшифровка ВПЧ 16, 18 — результат «Не обнаружено»

Расшифровка ВПЧ 16, 18 — результат «Обнаружено»

Важность исследования

Согласно руководству по скринингу и профилактике рака шейки матки, принятому в США «American Cancer Society, American Society for Colposcopy and Cervical Pathology and American Society for Clinical Pathology Screening Guidelines for the Prevention and Early Detection of Cervical Cancer (2012 г)», ВПЧ-тест совместно с ПАП-тестом жидкостным признан предпочтительным методом скрининга цервикальной патологии у женщин после 27-30 лет.

Для всех желающих в нашей медицинской клинике на Кутузовском проспекте можно сдать любые анализы на ВПЧ, в т.ч 16 и 18 типы. Цены на услуги представлены в таблице ниже.

ВПЧ ВКР генотипирование

ВКР расшифровывается как высокий канцерогенный риск.

Таким образом, это исследование отличается тем, что определяются только высокоонкогенные вирусы.

К примеру, вы не получите заключение: обнаружен 6, 11 или другой тип с низкой онкогенностью.

На них тестирование может не проводиться.

Ситуации, когда требуется типирование именно на вирусы ВКР:

• сниженный иммунитет (в том числе по причине ВИЧ);
• «плохие» результаты анализа на онкоцитологию;
• клинические признаки цервикальной дисплазии.

То есть, анализ делают, когда риск онкопатологии у конкретного пациента оценивается как высокий.

При этом может быть неважным, присутствуют ли другие вирусы из числа тех, которые почти никогда не вызывают рак.

Общая информация

Данные возбудители передаются при половых контактах (вагинальном, анальном, оральном), контактно-бытовым путём и вызывают у женщин поражения слизистых оболочек влагалища и шейки матки. Самые безобидные из этих заболеваний — доброкачественные остроконечные кондиломы половых органов, самое опасное — рак шейки матки.

Известно, что в течение 6-16 месяцев у 50-70% инфицированных женщин вирус папилломы человека уходит из организма самостоятельно, без какого-либо лечения, не вызывая заболеваний (так называемая спонтанная элиминация). Только у нескольких процентов женщин с хронической (персистентной) ВПЧ-инфекцией 16 или 18 типа через 10-15-20 лет может развиться злокачественный процесс в шейке матки.

Онкологию могут вызвать только ДНК типов вируса папилломы человека, относящиеся к группе высокого канцерогенного риска. Чаще всех могут приводить к CIN 1, 2, 3 степени и раку 16 и 18 типы ВПЧ.

Ученые, проведя ряд исследований, пришли к выводу, что виновником развития инвазивных аденокарцином (рак шейки матки и прямой кишки) в большинстве случаев становится все же ВПЧ-18, а в тех случаях, когда выявляют оба штамма вируса, 18-й тип способствует быстрому прогрессированию болезни. В случае неинвазивных видов железистого рака, в том числе полового члена у мужчин, ведущая роль принадлежит ВПЧ-16.

ВПЧ 16 ВПЧ 18

Согласно рекомендациям гинекологов, полный анализ на вирус (Дайджен-тест на онкогенные типы ВПЧ) необходимо проходить регулярно — раз в год. И в качестве начального скринингового тестирования подходит простой качественный ПЦР-тест, определяющий ДНК всех типов ВПЧ высокого канцерогенного риска, и один из них — это анализы на ДНК ВПЧ 16 и ВПЧ 18 типов у женщин всех возрастов и мужчин.

ВПЧ генотипирование: количественный анализ

Врачу мало знать только тип вируса.

Необходима также информация о его количестве.

Единицей измерения служит количество ДНК в 100 тысячах эпителиальных клеток.

Их должно быть меньше 10 в 5 степени.

Если этот порог достигнут или превышен, такая концентрация вируса считается клинически значимой.

Онкогенные вирусы в таком количестве провоцируют интраэпителиальную неоплазию.

А затем на её фоне развивается рак.

Зачем врачу знать количество вируса:

• чтобы понять, опасен ли он;
• дать прогноз дальнейшему развитию инфекции;
• оценить результативность лечения;
• спланировать дальнейшее ведение пациентки (в том числе методом наблюдения, когда периодически проводятся осмотры и взятие анализов).

Анализ проводят на 10-14 высокоонкогенных типов.

Для определения количественных показателей проводится ПЦР в реальном времени.

Она дает возможность дифференцировать клинически значимую концентрацию вируса от разрешающихся или транзиторных форм инфекции.

Human Papillomavirus, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Молекулярно-генетическое исследование, в ходе которого выявляется ДНК вируса папилломы человека и количественно определяется вирусная нагрузка в материале.

Определяется количество только ВПЧ высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы) – без указания типа.

Синонимы русские

Вирус папилломы человека (ВПЧ), папиллома-вирус человека.

Синонимы английские

Human Papillomavirus, DNA, Quantitative; HPV, Viral Load.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок урогенитальный (с секретом предстательной железы), ректальный мазок.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Женщинам рекомендуется сдавать урогенитальный мазок или мочу до менструации или через 2 дня после её окончания.
• Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка или мочи.

Общая информация об исследовании

Вирус папилломы человека – ДНК-содержащий вирус из семейства паповавирусов, ассоциированный с развитием кондилом, бородавок, предраковых изменений аногенитальной области, рака шейки матки. Существует более 100 типов ВПЧ, более 30 из них могут инфицировать половые пути, и около 14 генотипов связаны с развитием рака шейки матки, прямой кишки, полового члена и новообразований некоторых других локализаций (например, орофарингеальной карциномы).

Онкогенные папиллома-вирусы имеют в составе ДНК белки Е6/Е7, которые способны подавлять процессы апоптоза (запрограммированной гибели) в клетках с измененным генетическим материалом. Генотипы 1, 2, 3, 5 считаются неонкогенными, а генотипы 6, 11, 42, 43, 44 относятся к папиллома-вирусам низкого онкогенного риска. К ВПЧ высокого онкогенного риска относятся генотипы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 и 68.

Основной путь распространения инфекции – половой, включая орально-генитальные и анальные контакты, также возможна вертикальная (от матери ребенку) и контактно-бытовая передача инфекции. В организм человека может попасть несколько типов ВПЧ одновременно. Заражение обычно происходит после начала половой жизни в возрасте 16-25 лет. При инфицировании онкогенными генотипами вируса между 25 и 35 годами вероятны интраэпителиальные поражения и, как следствие, через несколько лет рак. В 70 % случаев в течение первого года и в 90 % случаев через 2 года после инфицирования возможно самоизлечение.

Рак шейки матки (РШМ) по распространенности занимает 3-е место среди всех злокачественных опухолей у женщин (после рака молочной железы и рака толстой кишки). Частота инвазивного рака шейки матки в мире составляет 15-25 на 100 000 женщин. Новообразования шейки матки возникают в основном у женщин среднего возраста (35-55 лет), редко диагностируются у женщин моложе 20 лет и в 20 % случаев выявляются в возрасте старше 65 лет. 5-летняя выживаемость при локализованном (местном, in situ) раке шейки матки равна 88 %, в то время как выживаемость при распространенном раке не превышает 13 %. Кроме инфицирования онкогенными генотипами ВПЧ, риск развития рака шейки матки повышают курение, хламидийная или герпетическая инфекция, хронические воспалительные гинекологические заболевания, длительное применение противозачаточных препаратов, множественные роды, случаи рака шейки матки в семье, раннее начало половой жизни, частая смена половых партнеров, недостаточное поступление с пищей витаминов А и С, иммунодефициты и ВИЧ-инфекция. Несмотря на то что вирус папилломы человека не всегда приводит к новообразованиям, более 93 % случаев рака шейки матки ассоциированы с ним.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с высокой чувствительностью и специфичностью выявляет ДНК вируса папилломы человека (ВПЧ) в более чем 90 % случаев рака и 75-85 % интраэпителиальной неоплазии с выраженной дисплазией. По данным исследований, количественное содержание вируса в материале коррелирует со степенью неоплазии: чем выше вирусная нагрузка, тем выраженнее цитологические изменения в эпителии. При обследовании необходимо учитывать генотип вируса, наличие и степень цитологических и гистологических изменений в тканях, увеличение или снижение вирусной нагрузки через несколько месяцев (6 месяцев и более) после предыдущего обследования.

Для чего используется исследование?

• Чтобы оценить риск развития новообразований, ассоциированных с ВПЧ (рак шейки матки, рак прямой кишки, рак аногенитальной области и других локализаций).
• Для контроля за эффективностью лечения предраковых заболеваний, ассоциированных с ВПЧ.
• Для мониторинга папиллома-вирусной инфекции и прогнозирования её течения.

Когда назначается исследование?

• При выявлении цитологических изменений в мазке на атипию, в мазке по Папаниколау, в гистологическом препарате.
• При кондиломах и других морфологических изменениях половых путей.
• При скрининге рака шейки матки у женщин старше 25-30 лет (в качестве дополнительного исследования).
• При наблюдении за инфицированными ВПЧ.
• При лечении рака и предраковых состояний, ассоциированных с ВПЧ.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Уровень вирусной нагрузки интерпретируется с учетом результатов цитологического исследования мазков, гистологических изменений в биоптате и генотипа вируса, изменении его количества с течением времени.

• Количество ДНК ВПЧ не определяется при отсутствии вируса в исследуемом образце или его минимальном количестве (ниже детектируемого уровня) – риск развития патологического процесса, связанного с ВПЧ, минимальный.
• Клинически малозначимая концентрация вируса (менее 103 копий ДНК ВПЧ на 105 клеток) – минимальный риск развития дисплазии, транзиторное течение вирусного процесса.
• Клинически значимая концентрация вируса (более 103 копий ДНК ВПЧ на 105 клеток) – хроническая инфекция с высоким риском развития дисплазии и РШМ.
• Более 105 копий ДНК ВПЧ на 105 клеток при установленном факте персистентного течения инфекции (ВПЧ выявляется более 1 года) – усиленная вирусная нагрузка, ассоциированная с повышенным риском тяжелой дисплазии, часто встречается при РШМ.
• Снижение вирусной нагрузки в 10 раз за 6 месяцев – транзиторная инфекция.
• Рост вирусной нагрузки через 6 и более месяцев после лечения указывает на возможность рецидива.

Что может влиять на результат?

Недостоверный результат может быть получен при:

• неправильном взятии и хранении материала;
• загрязнении исследуемого материала.

Важные замечания

• Инфицирование ВПЧ не всегда приводит к раку шейки матки.
• Возможно одновременное заражение несколькими генотипами ВПЧ.
• Результат анализа должен интерпретироваться с учетом заключений цитологического и гистологического исследований.

Также рекомендуется

• Human Papillomavirus 16/18 (HPV 16/18), ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus 6/11 (HPV 6/11), ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК без определения типа [ПЦР]
• Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК генотипирование [реал-тайм ПЦР]
• Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала – окрашивание по Папаниколау (Рар-тест)
• Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала на атипию
• Антиген плоскоклеточной карциномы (SCCA)

Кто назначает исследование?

Гинеколог, онколог.

Литература

• Arbyn M. et al. (2010). «European Guidelines for Quality Assurance in Cervical Cancer Screening. Second Edition–Summary Document». Annals of Oncology 21 (3): 448–458.
• Hsiu-Ting Tsai, Ching-Hu Wu, Hsiao-Ling Lai, et al. Association between Quantitative High-Risk Human Papillomavirus DNA Load and Cervical Intraepithelial Neoplasm Risk Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2005;14:2544-2549.
• Saslow D, Solomon D, Lawson HW, et al. American Cancer Society, American Society for Colposcopy and Cervical Pathology, and American Society for Clinical Pathology Screening Guidelines for the Prevention and Early Detection of Cervical Cancer. Am J Clin Pathol. 2012;137:516-542.
• «Genital HPV Infection – CDC Fact Sheet». Centers for Disease Control and Prevention (CDC). April 10, 2008. Retrieved 13 November 2009.
• Материалы и рекомендации Противоракового Общества России. Режим доступа: /%d0%b0%d1%83%d1%82%d0%be%d1%81%d0%be%d0%bc%d1%8b

Кому рекомендовано генотипирование ВПЧ?

В нашей стране типирование назначается не с профилактической целью, как на Западе, а по медицинским показаниям.

Многие женщины не проходят скрининг.

Поэтому частота цервикального рака и смертность от него в стране остается высокой.

Обычно женщины приходят к врачу, если у них появились бородавки на гениталиях, либо были получены патологические результаты цитологического исследования цервикального мазка.

Но большинство международных организаций рекомендуют делать анализ на ВПЧ даже без каких-либо симптомов или предварительных исследований.

То есть, проводить его всем подряд поголовно.

Согласно рекомендациям FIGO исследование на ВПЧ проводят 1 раз в 5 лет до возраста 65 лет.

ВОЗ рекомендует делать анализ минимум 1 раз всем женщинам, пребывающим в возрасте 30-49 лет.

Необходимость обследования на ВПЧ предусмотрена и российским приказом Минздрава 572н от 1 ноября 2012.

Непосредственно генотипирование (определение точного типа ВПЧ) не является обязательным.

Но по возможности рекомендуется проводить типирование хотя бы на 16 и 18 типы как на самые опасные среди всех существующих.

Допускается также применение альтернативных исследований.

Широко используется Digene-тест.

Он основан на гибридизации участков ДНК с РНК зондами.

В дальнейшем они улавливаются антителами с флуоресцентной меткой.

При позитивном результаты выдаются количественные показатели.

Существуют также тесты, основывающиеся на обнаружении РНК ВПЧ.

В частности, тест Aptima способен обнаружить 14 высокоонкогенных типов с частичным генотипированием.

Проверка здоровья после отдыха (ВПЧ тест, скрининг рака шейки матки)

Отпуск – время для себя, когда хочется влюбляться. Время курортных романов… Неважно, будет он иметь продолжение или нет, сегодня мы поговорим о самом главном – женском здоровье, а именно, о ВПЧ. Почему мы вспоминаем про вирусы папилломы человека?

Вирусы папилломы человека широко распространены, вызывают различные заболевания и поражения кожи, гортани, мужских и женских половых органов. Большинство из них неопасны. Самые коварные типы ВПЧ называют высокоонкогенными, то есть способными вызывать рак. Четкая связь есть между определенными типами вируса и раком шейки матки. Источником инфекции является исключительно человек, преимущественный путь передачи – половой. Но возможен и бытовой механизм, когда заражение происходит в саунах, бассейнах, СПА салонах. По последним данным, до 90% населения заражены ВПЧ и продолжают их распространять.

К высокоонкогенным типам ВПЧ относят 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 50, 51, 56, 58, 64, 68. 16 и 18 типы признаны наиболее опасными.

Однако, ВПЧ- инфекция не всегда приводит к раку. Если, помимо ВПЧ, имеются факторы риска, вероятность запуска опухолевого процесса гораздо выше. К ним относят хламидийную инфекцию, наличие нескольких половых партнеров, хроническое воспаление шейки матки, курение, стрессы. Здоровая и крепкая иммунная система обычно справляется с ВПЧ и вирусы исчезают из организма через 6-15 месяцев.

За открытие связи ВПЧ и рака шейки матки немецкий учёный Харальд цур Хаузен получил Нобелевскую премию. Особенность течения папилломавирусной инфекции в том, что у нее нет явных проявлений. Женщину ничего не беспокоит и не настораживает. А в это время ВПЧ проникают в глубокие слои и встраиваются в ДНК, изменяя структуру клетки, её способность к полноценному развитию и размножению. Постепенно формируется дисплазия – предраковое состояние. Если не остановить процесс на раннем этапе, клетки превратятся в опухолевые. Рак шейки матки очень коварен, может распространяться и давать метастазы, что без лечения приводит к смертности.

Теперь вы понимаете важность своевременного обследования на ВПЧ и цитологию? И делать это нужно регулярно, а при смене полового партнера – обязательно! Даже если мужчина считает себя здоровым.

Для того, чтобы грамотно обследоваться, важно запомнить несколько важных моментов:

• Если делается количественный тест на ВПЧ, то врач смотрит на концентрацию вируса. Есть исследования, при которых определяется самая низкая концентрация вируса, и при отсутствии других признаков лечения не требуется, только наблюдение.
• Существует много тестов на ВПЧ, и сравнивать результаты исследований, выполненные разными методами, неправильно.
• Консультируйтесь с гинекологом. Для принятия решения необходимо учитывать все данные: жалобы, характер выделений, что видно в зеркалах и при кольпоскопии, результаты ВПЧ теста и цитологии, другие лабораторные заключения.
• Нередко возникают ситуации, когда сначала определяется один тип ВПЧ, а через некоторое время – другой, или несколько. Такая ситуация возможна. ВПЧ редко работают в одиночку и проникают глубоко, «прячутся» в клетках.
• Важно правильно подготовиться к исследованию: исключить половой акт, местные процедуры, кольпоскопию и трансвагинальное УЗИ за 48 часов; не обследоваться во время месячных.

Для установления правильного диагноза проводят тесты на ВПЧ и мазок на цитологию, каждый тест преследует определенную цель:

• Исследования на ВПЧ – найти онкогенные типы, обеспечить женщине наблюдение и лечение, чтобы не допустить дисплазию
• Цитологическое исследование – не пропустить дисплазию (изменения клеток)

Не всегда каждое из исследований по отдельности позволяет понять полную картину происходящего.

• Одновременное проведение ВПЧ теста и цитологии из одного биоматериала – самое верное решение, позволяющее врачу выработать грамотную тактику лечения. Становится ясно, что клетка меняется под влиянием ВПЧ.

Преимущества тестов лаборатории KDL

ВПЧ тест высокого канцерогенного риска (ROCHE COBAS).

• Выявляет концентрацию вируса, которая требует контроля и лечения (будет получен ответ «обнаружено»). Более низкие уровни, не имеющие клинического значения, но волнующие и пугающие женщин, не определяются.
• ВПЧ наиболее высокого риска: 16 и 18 типы, — оцениваются по отдельности.
• Другие типы вирусов по статистике вызывают рак гораздо реже. Они представлены в виде суммарного ответа.

Скрининг рака шейки матки (жидкостная цитология BD ShurePath) с ВПЧ тестом (ROCHE COBAS4800)

• Одновременно выполняет две задачи
• Жидкостная цитология – усовершенствованный метод контроля клеток, точный и надежный. Биоматериал берётся в специальный контейнер, а не на стекло; анализатор выполняет качественный и тонкий мазок, позволяющий рассмотреть каждую клетку по отдельности; при необходимости можно выполнить несколько мазков; тест проводится в формате PAP (окраска по Папаниколау), что соответствует международным рекомендациям.
• В станах, где данный тест является обязательным исследованием, уровень смертности от рака шейки матки низкий.

Обследоваться на ВПЧ после активного отдыха – шанс не пропустить вирус и не допустить предраковые заболевания и рак. Обследуйтесь своевременно с KDL и будьте здоровы!

Что делать, если выявлены опасные типы ВПЧ?

Риск обнаружения опасных типов ВПЧ у отдельно взятого человека невысокий.

У большинства людей никакие разновидности этого вируса не выявляются вообще.

Если же пациент инфицирован, то с высокой вероятностью это неопасный тип ВПЧ.

Низкоонкогенные разновидности встречаются гораздо чаще.

Если же вам не повезло, и у вас обнаружили высокоонкогенный ВПЧ, нужно смотреть на его количество.

В случае, когда оно небольшое, лечение не требуется.

Скорее всего, ваш организм уже начал избавляться от вируса, и вскоре он перестанет определяться.

Хуже, если концентрация его высокая.

В таком случае необходимо следующее:

• дополнительные анализы;
• лечение;
• динамическое наблюдение.

У пациентки берут мазок на онкоцитологию.

Чаще всего это исследование проводят не после генотипирования ВПЧ, а одновременно с этим тестом.

По результатам этих двух анализов может быть принято решение о необходимости кольпоскопии.

Она нужна для выявления участков измененного эпителия (предраковых процессов).

В свою очередь результаты кольпоскопии (осмотра цервикса) могут потребовать проведения биопсии.

Это процедура, при которой берут фрагмент ткани и отправляют на гистологическое исследование.

По его результатам может быть диагностирована как злокачественная опухоль, так и предраковый процесс 1-3 стадии.

1 стадия обратима, тогда как на 2-3 требуется «прижигание», чтобы предотвратить рак.

Но развиваются предраковые процессы очень медленно.

Если вовремя провести противовирусное лечение, то вирус исчезает из организма, и эпителий шейки матки восстанавливается.

Пациентов обязательно наблюдают.

Они сдают анализы раз в полгода, чтобы оценить, увеличивается или уменьшается концентрация вируса.

Для его элиминации используют противовирусные и иммуномодулирующие препараты.

Можно ли делать ВПЧ без генотипирования?

Конечно же, делать такой анализ можно.

Он тоже достаточно информативен.

Генотипирование ВПЧ цены имеет более высокие, и такие затраты не всегда нужны.

В любом случае в результате проведения теста будет определен тип или нет, врач узнает, присутствует ли в организме папилломавирус ВКР.

Если он есть, и если присутствует в большой концентрации, в любом случае пациенту необходимо:

• лечение;
• динамическое наблюдение.

И это нужно, вне зависимости от конкретной разновидности обнаруженного вируса.